在多克隆抗体（多抗）定制中，抗原类型的选择是决定成败的核心前提，其依据需紧密结合研究目标（如检测对象、应用场景）、抗原本身的理化特性（如免疫原性、可及性）及实验可行性（如制备难度、成本）。不同抗原的免疫原性、特异性及制备复杂度差异显著，直接影响免疫应答效率和最终抗体的质量。

一、抗原类型的选择依据（核心原则：匹配研究目标+兼顾免疫原性与可行性）

    多抗定制的核心需求是获得 “能特异性识别靶分子” 的抗体，因此抗原选择需围绕 “靶分子的存在形式” 和 “研究的应用场景” 展开，同时需评估抗原的免疫原性（能否有效激活免疫系统）和制备难度。以下是四类主流抗原的选择逻辑：

1. 重组蛋白抗原：首选“高特异性+高免疫原性”的通用方案

    定义：通过基因工程技术（如原核/真核表达系统，如E.coli、CHO细胞）表达并纯化的靶蛋白（可含标签，如His、GST）。

选择依据：

    研究目标是 “完整功能蛋白” 或 “特定结构域”：若需检测天然蛋白的整体结构、或研究蛋白的功能结构域（如酶活性中心、结合结构域），重组蛋白可模拟天然蛋白的空间构象，诱导产生识别 “构象表位” 或 “线性表位” 的抗体。

    靶蛋白天然丰度低、难以纯化：如细胞内低表达蛋白、膜蛋白（可通过表达胞外域实现），重组表达可大量制备高纯度抗原。

    追求高特异性和可重复性：重组蛋白序列明确、纯度可控，可避免天然蛋白中杂蛋白的干扰，确保抗体的特异性；且批次间差异小，实验可重复。

典型应用场景：

    Western Blot（WB）、免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF）检测天然蛋白；

    蛋白 - 蛋白相互作用研究；

    抗体制备的 “金标准” 对照抗原。

 

2. 合成多肽抗原：聚焦 “特定线性表位” 的精准方案

    定义：根据靶蛋白的氨基酸序列，化学合成的短肽（通常10-20个氨基酸），多需与载体蛋白（如BSA、KLH）偶联以增强免疫原性。
选择依据：

    研究目标是 “蛋白的特定线性表位”：如蛋白的磷酸化位点（如p-ERK1/2的Thr202/Tyr204）、剪切位点、翻译后修饰位点，或仅需识别蛋白的一段保守序列（如跨膜区、信号肽）。

    靶蛋白难以表达或易降解：如超大分子量蛋白、高度疏水的膜蛋白、易聚集的变性蛋白，可通过合成其关键表位肽避开表达难题。

    需区分同源蛋白或异构体：若不同蛋白仅在特定短序列上有差异（如亚型特异性序列），合成该差异肽可诱导出特异性抗体，避免交叉反应。

典型应用场景：

    磷酸化蛋白检测（如p-AKT）；

    同源蛋白的区分（如不同亚型的GPCR）；

    病毒抗原的保守表位检测（如新冠病毒的S蛋白受体结合域肽）。

 

3. 小分子半抗原：针对“无免疫原性小分子”的特殊方案

    定义：分子量＜1000Da 的有机小分子（如药物、激素、毒素、农药残留），自身无免疫原性，必须与载体蛋白（如OVA、BSA）偶联后才能作为抗原。
选择依据：

    研究目标是 “小分子化合物”：如药物代谢动力学研究（检测血液中的药物浓度）、食品安全检测（如瘦肉精、抗生素残留）、环境污染物检测（如多环芳烃）。

    需增强小分子的免疫原性：小分子无法单独激活B细胞和T细胞，偶联载体后可借助载体的免疫原性触发免疫应答，诱导针对小分子的特异性抗体。

典型应用场景：

    兽药残留检测（如克伦特罗）；

    激素检测（如雌激素、睾酮）；

    药物浓度监测（如地高辛、环孢素）。

 

4. 全细胞抗原：面向“细胞表面整体抗原”的广谱方案

    定义：以完整细胞（如肿瘤细胞、细菌、病毒感染细胞）作为抗原，免疫动物后获得识别细胞表面所有可及抗原的多抗混合物。
选择依据：

    研究目标是 “细胞表面的未知抗原” 或 “整体细胞表型”：如发现新的肿瘤标志物、分析细胞分化过程中的表面抗原变化，全细胞抗原可保留所有表面蛋白的天然构象，诱导针对多种表位的抗体。

    需制备 “细胞特异性抗体”：如区分正常细胞与肿瘤细胞、不同分化阶段的细胞，全细胞免疫可获得识别细胞独特表面特征的抗体。

典型应用场景：

    肿瘤细胞表面抗原的筛选；

    细胞分型与鉴定（如免疫细胞亚群分析的辅助抗体）；

    病毒感染细胞的检测（如HIV感染的T细胞）。

二、不同抗原类型对定制成功率的影响（核心维度：免疫原性、特异性、制备难度）

    多抗定制的 “成功率” 通常以 “能否获得效价达标（如ELISA效价≥1:100000）、特异性良好（无明显交叉反应）的抗体” 为衡量标准。不同抗原的特性直接影响免疫应答效率和抗体质量，具体差异如下表所示：

抗原类型	免疫原性（激活免疫应答能力）	抗体特异性	制备难度与成本	定制成功率（综合评估）	核心风险点
重组蛋白	高（构象/线性表位丰富，易激活T/B细胞）	高（序列明确，杂蛋白少）	中（需表达纯化，标签可能干扰）	★★★★☆（最高）	表达失败（如蛋白不溶、降解）； 标签引发非特异性抗体
合成多肽	低→中（需偶联载体，仅含线性表位）	极高（精准针对目标序列）	低（合成简单，成本可控）	★★★☆☆（中等偏上）	表位预测不准（抗体无法识别天然蛋白）； 偶联效率低
小分子半抗原	极低（必须偶联载体，仅单一表位）	高（针对特定小分子）	中（偶联步骤关键，载体选择影响免疫原性）	★★☆☆☆（中等偏低）	载体干扰（抗体识别载体而非小分子）； 交叉反应（与结构类似小分子）
全细胞	高（抗原种类多，易激活免疫应答）	低（识别多种细胞表面抗原，特异性差）	低（细胞培养简单，无需纯化）	★★★☆☆（中等）	抗体混杂（需后续筛选特异性克隆）； 批次间细胞差异影响一致性

关键影响因素解析：

（1）免疫原性是成功率的核心决定因素

    重组蛋白和全细胞抗原的免疫原性最强：前者含多个表位，后者提供丰富的细胞表面抗原，均能有效激活T细胞辅助B细胞产生高滴度抗体，因此成功率最高；

    多肽和小分子需依赖载体：若载体偶联效率低（如多肽与BSA的连接比例不当），或载体本身免疫原性弱（如OVA弱于KLH），会导致免疫应答不足，抗体效价偏低。

（2）特异性与 “抗原纯度/表位唯一性” 直接相关

    合成多肽的特异性最高：仅针对目标短序列，几乎无杂表位干扰；

    重组蛋白次之：但需注意 “标签免疫原性”——若标签（如His）未被封闭，可能产生针对标签的非特异性抗体，需通过 “标签阴性对照” 验证；

    全细胞最低：抗体是针对细胞表面所有可及抗原的混合物，需通过 “同源细胞吸附” 或 “亲和纯化” 筛选特异性抗体，否则易出现交叉反应。

（3）制备难度决定 “实验可行性”

    合成多肽和全细胞最易制备：前者可直接委托化学合成，后者仅需常规细胞培养；

    重组蛋白需克服 “表达瓶颈”：如膜蛋白在原核系统中易形成包涵体，真核表达成本高；小分子需优化偶联条件（如使用EDC、SMCC等交联剂），偶联效率直接影响免疫效果。

 

三、总结与选择建议

优先选择原则：

    若靶蛋白可表达，重组蛋白是首选：兼顾高免疫原性、高特异性和广泛适用性；

    若聚焦特定表位（如修饰位点、亚型差异），合成多肽是最佳选择：精准且成本可控；

    若检测小分子，必须选择偶联载体的小分子半抗原：需注意载体的免疫原性和偶联效率；

    若研究细胞表面未知抗原，全细胞抗原是唯一选择：但需后续特异性筛选。

提升成功率的关键措施：

    重组蛋白：选择合适的表达系统（如真核系统表达需构象的蛋白），去除标签或使用 “标签封闭抗体”；

    合成多肽：通过生物信息学工具（如BepiPred、ABCpred）预测高免疫原性表位，优先选择KLH作为载体；

    小分子半抗原：优化偶联比例（通常小分子：载体=10:1~20:1），选择与检测体系无交叉的载体；

    全细胞：使用高纯度、活性稳定的细胞，免疫后通过 “阴性细胞吸附” 去除非特异性抗体。

 

    抗原类型的选择需 “量体裁衣”——以研究目标为核心，平衡免疫原性、特异性和制备可行性，才能最大化多克隆抗体制备的成功率。