在单克隆抗体制备中，骨髓瘤细胞株是杂交瘤技术的核心 “伴侣细胞”，其主要功能是为B淋巴细胞提供永生化增殖能力，并与B细胞融合形成能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。目前SP2/0和NS0是最常用的两种骨髓瘤细胞株，二者在细胞特性、抗体分泌能力、代谢缺陷等方面存在显著差异，选择时需结合实验目标、下游应用及成本综合判断。

一、常用骨髓瘤细胞株（SP2/0 vs NS0）的核心特点对比

    SP2/0和NS0均源自小鼠骨髓瘤（BALB/c 小鼠），且均为次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷型（HGPRT⁻） 或胸腺嘧啶激酶缺陷型（TK⁻） —— 这一关键代谢缺陷是后续 “杂交瘤筛选” 的基础（仅杂交瘤能在 HAT 培养基中存活，亲本骨髓瘤因无法合成核酸而死亡）。二者的具体差异如下表所示：

对比维度	SP2/0细胞株（Sp2/0-Ag14）	NS0细胞株（Non-Secreting0）
抗体分泌能力	本身不分泌内源性抗体（“无抗体背景”），融合后杂交瘤的抗体分泌水平中等（通常1-10μg/mL/10⁶细胞），抗体稳定性较好。	本身不分泌内源性抗体（“无抗体背景”），融合后杂交瘤的抗体分泌水平高（通常5-20μg/mL/10⁶细胞），部分克隆可达到更高水平，是高产量抗体制备的优选。
代谢缺陷类型	HGPRT⁻（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷），依赖外源嘌呤合成核酸；同时存在低水平的谷氨酰胺合成酶（GS）活性。	HGPRT⁻，且完全缺失谷氨酰胺合成酶（GS）活性——必须依赖培养基中的外源谷氨酰胺才能存活（这一特性可用于“GS基因筛选系统”，避免HAT筛选的局限性）。
细胞生长特性	贴壁/半悬浮生长（易聚团），对培养基要求较低（可在基础血清培养基如RPMI-1640中生长），适应能力强，克隆形成率高。	严格悬浮生长（分散性好），对培养基营养要求更高（需添加谷氨酰胺、胰岛素等，更适合无血清培养基规模化培养），细胞密度上限较高（适合生物反应器放大生产）。
下游应用适配性	更适合实验室小规模制备（如科研用抗体、诊断试剂用抗体），因培养门槛低、筛选周期短，成本相对可控。	更适合工业级大规模生产（如治疗性单克隆抗体），因悬浮生长特性适配生物反应器，且高分泌能力能降低生产成本，无血清培养兼容性更好。
基因工程改造潜力	改造案例较多（如敲除糖基化相关基因以优化抗体糖型），但改造后稳定性略逊于NS0。	因代谢背景清晰（GS缺陷），是基因工程改造的理想宿主（如通过导入GS基因实现筛选，或改造糖基化路径生产“人源化糖型抗体”），改造后细胞株稳定性高。

 

二、选择骨髓瘤细胞株时需考虑的关键因素

    选择 SP2/0 还是 NS0，本质是匹配 “实验目标” 与 “细胞特性”，核心需评估以下5个维度：

1. 抗体产量与下游规模需求

    小规模科研/诊断用抗体（毫克 - 克级）：优先选SP2/0。其贴壁/半悬浮生长特性适合实验室培养瓶操作，培养基成本低，筛选周期短（通常 2-3 周可获得阳性克隆），虽产量中等，但足以满足 Western Blot、ELISA 等科研需求。

    大规模工业生产/治疗性抗体（克 - 千克级）：优先选NS0。其严格悬浮生长、高分泌能力（比 SP2/0 高 2-3 倍）及无血清培养基兼容性，能适配 2000L 以上生物反应器规模化培养，显著降低单位抗体的生产成本，且抗体产量稳定，符合 GMP生产要求。

 

2. 抗体质量与修饰需求

    常规抗体（无需特殊糖基化）：SP2/0 和 NS0 均可。二者均为小鼠源细胞，分泌的抗体糖型为 “小鼠型”（含 α-1,3 - 半乳糖基，可能引发人体免疫反应），适合科研或动物实验用抗体，不适合直接用于人体治疗。

    人源化 / 治疗性抗体（需优化糖型）：优先选NS0。NS0 的糖基化系统更易通过基因工程改造（如敲除 α-1,3 - 半乳糖基转移酶基因），生产出 “人源化糖型抗体”（降低免疫原性），这是治疗性抗体研发的关键要求。

 

3. 筛选系统的兼容性

    骨髓瘤细胞株的代谢缺陷决定了杂交瘤的筛选方法，需提前匹配：

    HAT 筛选系统（常规选择）：SP2/0 和 NS0 均适用。HAT 培养基含次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶（T），氨基蝶呤会阻断核酸 “从头合成途径”，而杂交瘤可通过 B 细胞的 HGPRT 和 TK 利用 H、T 进行 “补救合成途径” 存活，亲本骨髓瘤（HGPRT⁻/TK⁻）则死亡。

    GS 筛选系统（替代选择）：仅NS0适用。因 NS0 完全缺失 GS 活性，无法合成谷氨酰胺，可通过向骨髓瘤细胞导入 “谷氨酰胺合成酶（GS）基因” 作为筛选标记，在无谷氨酰胺的培养基中，仅整合了 GS 基因的杂交瘤能存活（避免 HAT 筛选中氨基蝶呤对细胞的毒性，提高克隆存活率）。

 

4. 培养成本与操作门槛

    培养成本：SP2/0 更低。SP2/0 可在含 10%-20% 胎牛血清（FBS）的基础培养基（如 RPMI-1640）中生长，血清和培养基成本低；NS0 需无血清或低血清培养基（含重组胰岛素、转铁蛋白等），且需严格控制谷氨酰胺浓度，培养基成本是 SP2/0 的 2-3 倍。

    操作门槛：SP2/0 更易上手。SP2/0 贴壁生长时便于观察和传代，聚团现象可通过轻柔吹打缓解；NS0 需悬浮培养，对摇瓶转速、溶氧、pH 控制要求更高，新手易出现细胞密度低、死亡的问题。

 

5. 细胞株的稳定性与合规性

    稳定性：NS0 更优。NS0 融合后的杂交瘤细胞株在长期传代（>50 代）后，抗体分泌能力的下降幅度（通常 < 10%）小于 SP2/0（通常 10%-20%），适合需要长期生产的场景。

    合规性：二者均需符合 “细胞株溯源要求”。工业级应用（如治疗性抗体）需选择经过 “支原体检测阴性”“无外源病毒污染” 的细胞株（如 ATCC 认证的 SP2/0 CRL-1581、NS0 CRL-1827），避免因细胞污染导致产品报废。

 

三、SP2/0 与 NS0 的选择决策树

    若目标是实验室小规模科研抗体（如 WB、ELISA 用），预算有限、操作经验较少 → 选SP2/0；

    若目标是大规模工业生产 / 治疗性抗体，需高产量、适配生物反应器、可改造糖型 → 选NS0；

   若需使用GS 筛选系统（避免 HAT 毒性） → 只能选NS0；

    若需人源化糖型抗体 → 优先选NS0。

    此外，除 SP2/0 和 NS0 外，还有人源骨髓瘤细胞株（如 ARH-77、U266）可用于制备全人源抗体，但因融合效率低、产量不稳定，目前应用远少于小鼠源细胞株，仅在特定人源抗体研发中使用。