小鼠单克隆抗体制备原理
小鼠单克隆抗体制备一般需要以下几个步骤:
免疫原制备:选择具有特异性的抗原,包括蛋白质、肽、多肽、细胞表面分子等。将其纯化或合成后,与适宜的佐剂混合,使小鼠免疫。
小鼠免疫:通常将小鼠多次注射免疫原,以诱导其产生免疫应答。可以通过ELISA或Western blot等方法检测小鼠血清中是否出现特异性抗体。
脾细胞融合:将小鼠脾脏中的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。
杂交瘤筛选:使用hAT(双氢柳氮吡啶)或azaguanine等筛选技术,筛选出能够产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。
单克隆抗体纯化和鉴定:从杂交瘤中挑选出单克隆细胞,进行扩增和培养,收集上清液,最终通过纯化技术得到纯的单克隆抗体。可使用Western blot、ELISA、免疫组化等方法进行鉴定和优化。
以上是小鼠单克隆抗体制备的基本步骤,整个流程可能需要数月时间,具体取决于多种因素,如抗原选择、动物模型、细胞融合条件、筛选方法以及抗体鉴定等。
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