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技术贴|史上最全IHC攻略，这谁顶得住？

信息来源：4118云顶集团作者：genecreate 发布时间：2019-10-30 13:22:37

4118云顶集团定制抗体的IHC验证图

抗体的IHC

4118云顶集团专注于抗体定制多年，一站式的抗体服务、多样性的宿主系统、规模化的生产、严格的质控标准，使得4118云顶集团的定制抗体稳定可靠，满足客户的应用需求，深受国内外客户的欢迎。

一张漂亮的IHC图是怎么诞生的？实验过程中我们应该注意些什么呢？

话不多说，直接上干货，现在小编就跟大家分享IHC 实验中可能出现的各种问题及应对策略，希望给科研君的实验带来实实在在的帮助~

问题	原因	解决方案
边缘效应	组织边缘贴附不牢，边缘组织松脱漂浮于液体中	PES/多聚赖氨酸处理玻片；组织切片尽量薄；尽量避免选用坏死较多的组织
边缘效应	试剂未充分覆盖组织	滴加试剂时让试剂完全覆盖组织
非特异性染色	抗体质量问题	使用质量有保证的抗体
	抗体孵育时间长	减少孵育时间
	抗体浓度过高	降低抗体浓度
	一抗为多抗	使用单克隆抗体
	内源性过氧化物酶及生物素	延长灭活时间
	封闭不足	延长封闭时间
	DAB孵育时间过久或浓度过高	按说明书配置试剂，镜下控制反应时间
	抗体孵育后洗涤不充分	每次孵育之后洗3*5次
	实验过程干片	及时滴加试剂
阴性结果	抗体浓度及质量	选择有质量保证的抗体，先做预实验摸索抗体使用浓度
	抗原修复不足	摸索合适的抗原修复方式及修复时间
	封闭时间过长	减少封闭时间
	DAB孵育时间短	镜下控制显色时间
	细胞通透不全，抗体未能进入细胞反应	选择合适的通透剂及其反应时间
	一抗二抗不匹配	选择正确来源的二抗
脱片	玻片未处理好	玻片清洗干净后用APES或多聚赖氨酸处理
	切片厚薄不均匀	更换刀片；调整好切片机状态
	烤片时间或温度不够	60℃ 2小时
	组织自身问题	肿瘤坏死组织及骨组织本身易脱片
	抗原修复时温度迅速变化	抗原修复后让其自然冷却
染色弱	抗体浓度低，孵育时间短	提高抗体浓度，延长反应时间
	试剂使用超过有效期	试剂定时更新
	滴加试剂时残余缓冲液过多使试剂稀释	滴加试剂前尽量减少残余液体
	封闭过度	减少封闭时间
着色不均匀	切片厚度不一致	更换刀片；调整好切片机状态
	试剂配制未混匀使局部浓度不一致	试剂充分混匀后滴加
	试剂未完全覆盖组织	滴加试剂时让试剂完全覆盖组织
	脱蜡不完全	更换脱蜡剂或延长脱蜡时间

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