多克隆抗体制备的免疫周期通常为4–8周，具体时长会因免疫原特性、动物种类和抗体效价要求有所调整。

 

一、多克隆抗体定制的典型免疫周期

    常规的动物免疫流程（以兔为例）分为以下阶段，总周期约5–7周：

1、基础免疫

    第0天：将免疫原与佐剂（如弗氏完全佐剂CFA）乳化后，对动物进行皮下多点注射，目的是激活初始B细胞，启动免疫应答。

 

2、加强免疫

    第14–21天：进行第一次加强免疫，免疫原搭配弗氏不完全佐剂（IFA），刺激B细胞克隆扩增。

    之后可根据效价检测结果，每10–14天重复1–2次加强免疫，直到血清抗体效价达到预期（如ELISA效价≥1:10000）。

 

3、效价检测与采血

    每次加强免疫后7–10天，采集少量血清检测抗体效价和特异性。

    当效价达标后，可进行试采血或终采血，完成抗体的初步制备。

    不同动物的免疫周期略有差异，比如小鼠免疫周期可缩短至4周左右，山羊、绵羊等大动物的周期可能延长至8周。

二、通过加强免疫提升抗体亲和力的关键策略

    抗体亲和力的提升核心是筛选高亲和力B细胞克隆，加强免疫的设计直接影响最终效果，具体方法如下：

 

1、优化加强免疫的时机

    基础免疫后，机体先产生低亲和力的IgM抗体，随后通过抗体亲和力成熟（体细胞高频突变+抗原选择）逐步产生高亲和力IgG。

    加强免疫需在抗体亲和力成熟的关键阶段进行，一般间隔10–14天一次，既给B细胞足够的突变时间，又能通过抗原再次刺激，筛选出高亲和力克隆。

 

2、调整免疫原的剂量和佐剂

    剂量：加强免疫的免疫原剂量可略低于基础免疫，避免高剂量抗原导致的免疫耐受，同时保证抗原能精准结合高亲和力B细胞受体。

    佐剂：基础免疫用CFA（含分枝杆菌，强免疫刺激），加强免疫必须换用IFA（无分枝杆菌，减少炎症反应），避免多次使用CFA引发动物严重肉芽肿或免疫抑制。

 

3、采用不同的免疫途径组合
    基础免疫以皮下/皮内注射为主（诱导局部淋巴结免疫应答），后期加强免疫可搭配静脉注射（无佐剂），让抗原快速进入血液循环，高效刺激脾脏等中枢免疫器官的高亲和力B细胞，进一步提升抗体亲和力。

 

4、基于效价和亲和力监测调整次数

    每次加强免疫后，不仅要检测抗体效价，还可通过竞争ELISA或表面等离子体共振（SPR）检测抗体亲和力。

    若亲和力未达标，可再增加1次加强免疫；若效价高但亲和力低，可适当延长两次加强免疫的间隔时间（如延长至21天），给B细胞更多突变和筛选机会。

 

5、抗原的纯化与处理

    加强免疫用的免疫原纯度需高于基础免疫，避免杂蛋白诱导非特异性抗体，确保抗原能优先激活针对目标表位的高亲和力B细胞克隆。

 

三、注意事项

    加强免疫次数并非越多越好，超过3次后抗体亲和力提升幅度会明显下降，甚至可能引发免疫耐受。

    不同免疫原的免疫原性差异大，比如蛋白类免疫原较易产生高亲和力抗体，多肽类免疫原则可能需要偶联载体蛋白，并增加加强免疫次数。