常用的分子互作检测技术有哪些?各有什么特点?
信息来源:4118云顶集团 作者:genecreate_cn 发布时间:2025-06-16 14:02:16
1、体内检测技术
酵母双杂交(Y2H):高通量筛选蛋白 - 蛋白互作,适用于构建互作网络,但可能存在核定位限制(如膜蛋白需改造)。
荧光素酶互补实验(LCI):通过荧光素酶片段重组检测互作,适用于植物活细胞内检测。
2、体外检测技术
免疫共沉淀(Co-IP):验证内源性蛋白互作,需特异性抗体,可结合质谱鉴定互作蛋白。
Pull-down:利用标签蛋白(如 His、GST)纯化互作蛋白,适用于体外验证,需重组蛋白表达。
表面等离子共振(SPR):实时定量检测分子亲和力(KD值),需固定配体,灵敏度高。
3、细胞水平检测技术
荧光共振能量转移(FRET):检测活细胞内蛋白距离(<10nm),需荧光标记蛋白。
生物发光共振能量转移(BRET):无需激发光,背景低,适用于GPCR等膜蛋白互作。
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