peg沉淀法提取外泌体步骤
PEG(聚乙二醇)沉淀法是一种常用的提取外泌体的方法。下面是一般的PEG沉淀法提取外泌体的步骤:
收集细胞培养上清液:在细胞培养达到一定程度后,将细胞培养基收集到离心管中。此过程应尽量避免细胞碎片和细胞颗粒的污染。
去除细胞残留物:将细胞培养上清液进行低速离心,通常在2000 g左右离心10分钟,以去除细胞碎片和大颗粒物质。收集离心后的上清液。
过滤上清液:使用0.22微米或0.45微米的滤膜滤过上清液,以去除细菌和细胞碎片等杂质。收集滤液。
添加PEG溶液:向滤液中加入适量的聚乙二醇(PEG)溶液。通常使用最终浓度为8%至10%的PEG溶液。将PEG均匀混合并轻轻摇晃离心管。
冷藏沉淀:将离心管放入4摄氏度的冰箱中,在4摄氏度下冷藏沉淀过夜或至少数小时。PEG溶液的作用是沉淀外泌体颗粒。
离心:将冷藏后的离心管放入高速离心机中,以最高速度离心20分钟以上。离心后,上清液中的外泌体颗粒会沉淀在离心管底部形成一个沉淀物。
除去上清液:轻轻吸取离心管顶部的上清液,避免干扰到沉淀物。可以使用吸管等工具进行操作。
外泌体沉淀物的处理:根据后续实验需要,可以使用适当的缓冲液重新悬浮外泌体沉淀物,然后进行进一步的分析或存储。
PEG沉淀法是一种常用的外泌体提取方法,但其提取效率和纯度可能会受到各种因素的影响。因此,在具体操作时,可以根据实验要求和样本特点进行优化和调整,以获得最佳的提取效果。
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