peg沉淀法提取外泌体步骤
以下是使用PEG(聚乙二醇)沉淀法提取外泌体的一般步骤:
细胞培养与收集:选择合适的细胞系进行培养,并在培养基中收集细胞上清液。通常,细胞培养至对数生长期后,将培养上清离心收集。
预处理:将细胞上清液通过低速离心(通常为2,000 × g,10分钟)去除细胞碎片和大颗粒。得到上清液。
超高速离心:将上一步得到的上清液转移至新的离心管中,进行超高速离心(通常为10,000-20,000 × g,30分钟至1小时)以沉淀小颗粒体。
滤过:将超高速离心的上清液通过0.22微米或0.45微米的滤膜进行过滤,去除残留的大颗粒和细胞碎片。
聚乙二醇(PEG)沉淀:将滤过后的上清液与预冷的PEG溶液(通常为10-20% PEG,含有NaCl)按比例混合,通常为4:1至1:1体积比。混合液在4摄氏度条件下静置数小时至过夜,使外泌体沉淀。
离心:将混合液在超高速离心(通常为10,000-20,000 × g,30分钟至1小时)的条件下进行离心,以沉淀外泌体。去除上清液。
再悬浮:将外泌体沉淀用适量的缓冲液(如PBS)再次悬浮,并进行洗涤步骤以去除残留的PEG。
冻存或进一步分析:可以选择将提取的外泌体进行冻存保存,或者进行进一步的检测、分析和研究。
具体的操作步骤可能会因实验室的设备和材料不同而有所差异。在进行PEG沉淀法提取外泌体之前,建议参考相关的实验方法和文献以获取更详细的步骤和操作细节。
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