酵母YIHGold菌株感受态制备方法
酵母双杂交(Y2H)实验中常用的酵母菌株之一是YIHGold菌株。为了制备YIHGold菌株的感受态,以下是一种常见的制备方法:
从冰冻细胞库中取出YIHGold菌株,将其转移到一块含有蔗糖的YPD(yeast extract/peptone/dextrose)平板上。在室温下孵育24-48小时,直到出现单个克隆的菌落。
从YPD平板上挑选一个单克隆菌落,接种到10 mL的YPD液体培养基中,室温下摇床培养过夜。
第二天,将过夜培养的YIHGold菌株离心收集细胞。将菌体重悬于10 mL的无菌蒸馏水中,并再次离心。
弃去上清,用1 mL的无菌蒸馏水重新悬浮菌体,并将其转移至2 mL离心管中。
菌体在离心管中用洗涤液(如SDS)或锡硫酸铵(TES)进行洗涤。加入适量的洗涤液,并轻轻混匀,然后离心收集菌体。
弃去洗涤液,用1 mL的无菌蒸馏水再次悬浮菌体,并将其转移至2 mL离心管中。
重复步骤5和6两次,以确保彻底洗涤掉洗涤液或锡硫酸铵。
最后一次弃去洗涤液,悬浮菌体于适量的无菌蒸馏水中,使细胞浓度稀释到所需的感受态浓度。
将制备好的感受态YIHGold菌株用冰冻保存方法保存。常见的方法是将菌体悬浮于甘油缓冲液中,然后分装到无菌冻存管中并存储在 -80°C 冷冻箱中。
在制备感受态YIHGold菌株的过程中,要保持无菌操作,并避免外源DNA的污染。此外,根据具体实验需求和Y2H系统的要求,有时可能需要对菌株进行进一步的处理和测试,比如检测报告基因活性、验证阳性对照等。
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